摘要:为探寻大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病防治中使用的抗生素替代物,降低水产养殖业抗生素的使用量,促进水产养殖业健康发展,研究了乳酸链球菌素Z(nisin Z)与抑菌剂(11种水产兽用抗生素、5种食品添加剂)复配对大黄鱼内脏白点病致病菌——变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)的体外抑制作用:首先,利用96孔微量稀释法测定乳酸链球菌素Z与各抑菌剂的最小抑制浓度(minimum inhibition concentration, MIC);其次,采用96孔微量稀释法结合棋盘法测定乳酸链球菌素Z与抑菌剂复配最小抑制浓度和分级抑菌浓度(fractional inhibitory concentration, FIC);最后,采用平板计数法绘制24 h杀菌曲线,结合电镜观察结果,进一步确定乳酸链球菌素Z与抑菌剂复配对变形假单胞菌的抑菌效果。结果显示,乳酸链球菌素Z单独使用对变形假单胞菌无抑制作用,与水产兽用抗生素磺胺嘧啶(SD)或食品添加剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)分别复配后具有协同抑菌作用。乳酸链球菌素Z最低复配浓度为3 125 mg·L-1,此时SD的MIC从128 mg·L-1降至32 mg·L-1,FIC指数为0.25(FIC≤0.5);EDTA-2Na的MIC值从400 mg·L-1降至200 mg·L-1,FIC指数为0.5(FIC≤0.5)。杀菌曲线与电镜观察显示,乳酸链球菌素Z与EDTA-2Na复配用药后变形假单胞菌表面粗糙、细胞膜边界模糊、细胞结构遭到破坏,24 h内有效抑制了变形假单胞菌的生长繁殖;乳酸链球菌素Z与SD复配用药使变形假单胞菌细胞结构严重破坏、细胞膜溶解、胞内物质明显外泄,在8 h内完全杀灭细菌。研究表明,乳酸链球菌素Z与EDTA-2Na或SD复配均提高了抗生素的抗菌活性,将该技术应用于治疗大黄鱼内脏白点病可以降低抗生素的使用量,具有实际应用价值。